柠檬水放一夜后若无变质通常可以饮用，但若出现异味、浑浊或霉变则不建议饮用。柠檬水变质主要与微生物繁殖、氧化反应、储存条件等因素有关。
柠檬水在室温下放置一夜后是否安全饮用取决于环境温度和密封性。夏季高温环境下细菌繁殖速度快，未密封的柠檬水可能在6-8小时内滋生大量微生物。冬季室温较低或冷藏保存时，密封良好的柠檬水可保存12-24小时。玻璃容器比塑料容器更不易滋生细菌，切开的柠檬片会加速水质腐败。维生素C在接触空气后会逐渐氧化失效，但不会产生有害物质。
出现絮状沉淀、表面浮膜或酸臭味时提示已变质，可能含有致病菌如大肠杆菌或霉菌毒素。糖尿病患者饮用变质的柠檬水可能引发胃肠炎，免疫力低下人群需特别注意。金属容器盛放的柠檬水因酸性腐蚀可能溶出重金属离子。反复冷冻解冻会破坏细胞结构导致营养物质流失，室温解冻后不宜再次冷藏。
建议使用密封玻璃瓶冷藏保存不超过24小时，饮用前观察颜色气味变化。胃肠敏感者可煮沸后饮用，但会损失部分营养成分。外出携带时可加入少量食盐抑制细菌生长，或改用真空保温杯保存。切开柠檬前需清洗表皮农药残留，使用后及时清理容器避免滋生霉菌。
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